| 24 ноября 2003
Интернет-конференция "Миастения"

Ланцова В.Б.

  • Новичок
  • *
  • 1
    Сообщений
Использование бактериально экспрессированного экстрацеллюлярного домена мышечного холинорецептора для диагностики миастении.

Ланцова В.Б1,2., Крюкова Е.В1., Азеева Е.А1., Сепп Е.К2., Цетлин В.И1.

ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.В. Овчинникова1. НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН2   Москва. Россия.

Миастения (мышечная астения, болезнь патологической мышечной утомляемости) – аутоиммунное заболевание, заключающееся в нарушении нервно-мышечной передачи вследствие повреждения постсинаптической мембраны антителами к ацетилхолиновым рецепторам (АХР) поперечно-полосатых мышц. Многообразие клинических проявлений, неоднозначность и субъективность оценки отдельных симптомов миастении делает насущной проблему поиска новых дополнительных методов диагностики и контроля за эффективностью лечения миастении.
Для определения уровня аутоантител  у больных нами разработан метод, в основе которого лежит взаимодействие антител с экстрацеллюлярным доменом α-субъединицы мышечного АХР человека, полученного с помощью экспрессии в E. Coli и ренатурированного в различных условиях. Материалом для исследования служила сыворотка крови 150 пациентов с генерализованной или глазной формой миастении и миастении с тимомой. Контрольную группу составили 12 добровольцев. Антигенную специфичность экспрессированых доменов, нанесенных на плашки, определяли в ИФА с помощью моноклональных антител (mAb35), и поликлональных кроличьих антител. Анализ сывороток больных показал, что более высокое содержание антител наблюдается у больных с генерализованной формой миастении и миастенией с тимомой. Этот результат качественно согласуется с литературными данными зарубежных лабораторий, использовавших радиоактивные изотопы и препараты мышечного АХР, полученных при хирургических операциях. Таким образом, предложенный нами метод может быть применен в качестве адекватного и удобного способа количественного определение антител к фрагменту мышечного АХР для оценки прогноза течения миастенического процесса и подбора адекватной патогенетической терапии.

«ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ IgG СЫВОРОТКИ КРОВИ ПРИ МИАСТЕНИИ»
Ланцова В.Б1,2., Сепп Е.К1., Цетлин В.И2.
НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН1. ИБХ им. М.М. Шемякина
и Ю.В. Овчинникова2. Москва. Россия.

Введение. Обнаружение в сыворотке крови больных миастенией повышенного количества аутоантител к ацетилхолиновому рецептору (АХР) является основным лабораторным тестом для подтверждения диагноза (D.Drachman,1978, A.Vincent, 1980). Известно, что примерно 70-80% антител направлено против главного иммуногенного региона a-субъединицы АХР [Th.Tsouloufis,2000].Однако количество антител не всегда коррелирует с особенностями клиники (Кузин М.И, Гехт Б.М,1996). В этой связи может оказаться перспективным исследование каталитической активности IgG антител при миастении.
Цель. Разработка дополнительных лабораторных методов диагностики и изучение роли IgG антител в патогенезе миастении.
Материал и методы. Материалом для исследования служила сыворотка крови 109 пациентов с генерализованной и глазной формами миастении, и генерализованной миастенией с тимомой. Для определения уровня аутоантител к АХР в сыворотке крови апробирован метод, в основе которого лежит взаимодействие антител с экстрацеллюлярным доменом a-субъединицы мышечного АХР человека, полученного с помощью гетерологической экспрессии соответствующего фрагмента кДНК в E. Coli. Каталитическая активность препаратов IgG исследовалась по их способности катализировать биохимические реакции: глутамилтранспептидазную (γ-ГТП), креатинфосфокиназную (КФК).
Результаты. Анализ сывороток больных показал, что более высокое содержание антител наблюдается у больных с генерализованной формой миастении и миастенией с тимомой. Препаратам IgG присуща абзимная (γ-ГТП и КФК) активность. В группе больных миастенией с тимомой КФК активность IgG антител в 1,5 раза выше, чем у пациентов без тимомы.
Выводы. Показана пригодность использования экстрацеллюлярного домена мышечного АХР для проведения ИФА. Выявленая абзимная активности IgG может быть использована для дифференциальной диагностики миастении и миастении с тимомой.


РОЛЬ АЦЕТИЛХОЛИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ АУТОИММУНЫХ И НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ.
Ланцова В.Б., Аскарова Л.Ш1., Сепп Е.К2., Завалишин И.А1
НИИ неврологии РАМН,  НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН.  Москва. Россия.
Введение. Нарушение функционирования никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (АХР) является причиной целого ряда заболеваний центральной и периферической нервной системы (Lena C., Changeux J.-P., 1998; Lindstrom J., 1996, 2000). Этиология таких заболеваний как боковой амиотрофический склероз (БАС), рассеянный склероз (РС) до настоящего времени является предметом научных дискуссий. При РС роль иммунологических нарушений является доказанной и общепризнанной. В последнее время установлено, что при  БАС IgG антитела (АТ) могут стимулировать Са2+-зависимый апоптоз мотонейронов in vivo через механизм окислительного стресса (Smith R.G. et al. 1996, 1999, Захарова М.Н., 2001). Известно, что из большой группы АХР только α7 подтип участвует в регуляции обмена кальция в нейронах, в мембранах он ассоциирован с ганглиозидом GM1 - одним из липидов, обеспечивающих стабильность миелина (Bruses J.L. et al., 2001). В зарубежной и отечественной литературе отсутствуют сообщения о роли нейрональных АХР в патогенезе БАС и РС.
 Целью настоящего исследования явилось изучение роли АТ к α7 подтипу АХР при этих заболеваниях.
Материалом для исследования служила сыворотка крови 31 больного РС и БАС и 6 здоровых доноров. Определение АТ осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа, результаты выражали в мкг/мл. В качестве антигена был использован белок, содержащий домен (7-208) α7 субъединицы АХР (получен в лаборатории рецепции нейропептидов ИБХ РАН – руководитель, профессор В.И.Цетлин).
Основные результаты. Отмечено повышение АТ  у 50.0% больных  РС и у 40%  больных БАС. Наибольшее количество АТ выявлено у больных с переднероговым (8.45+/-1.95), по сравнению со смешанным вариантом БАС (4.08+/-2.59) - t=2.27 и р=0.04, что может указывать на большую гетерогенность этиопатогенетических факторов при страдании нижнего мотонейрона. При РС ремитирующий характер течения заболевания сопровождается более высоким уровнем АТ (7.31+/-3.12), который статистически достоверно (t=2.23, p=0.047) отличается от вторично-прогредиентного (3.65+/-1.15). При первично-прогредиентном течении патологического процесса количество антител было еще более низким (2.9+/-0.2), что может свидетельствовать о роли аутоиммунных процесссов с поражением различных антигенных структур преимущественно на ранних этапах развития РС.  
Заключение. Таким образом, показана патогенетическая роль поражения различных антигенных структур при аутоиммунных болезнях, а также участие аутоиммуных механизмов на определенных этапах развития нейродегенеративных заболеваний нервной системы.